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QTRAP 6500+质谱与新一代离子淌度差分SelexION+技术对利马前列素的测定
发表时间:2023/11/30 14:13:11  |  点击率:795

利马前列素,是前列腺素E1的类似物,其主要药理作用是扩张末梢血管,达到增加血流量以及抑制血小板凝集的目的,对于改善各种局部缺血症状,如闭塞性血栓血管炎(TAO)伴发的溃疡、疼痛以及发冷等虚血性症状,以及后天性腰椎管狭窄症伴有的自觉症状(下肢疼痛、麻木)和行走能力有十分确切疗效,是很有应用前景的药物。

目前关于列马前列素的人体药代动力学数据非常有限,因此建立合适的人体血浆中列马前列素的检测方法用于评价其药代动力学行为十分必要,但其超低给药量(15-30ug/Day)以及极低的血浆达峰浓度(Cmax约为~1pg/mL)对检测方法的灵敏度提出了极高要求。三重四极杆质谱仪MRM扫描模式凭借其高灵敏度、高选择性、高特异性一直以来被视为药代动力学评价的首选检测手段,LC-MS/MS方法也被作为常规定量的黄金标准。

列马前列素本身为PGE1类似物,而人血浆中含有内源性的PGE1及其他多种结构类似物甚至同分异构体,这些内源性干扰成分是其人体药代动力学研究的又一大障碍。由于内源性干扰成分与列马前列素理化性质、结构非常相近,单纯依靠样品前处理和简单的色谱分离已经被证明无法有效消除或分离内源性干扰。目前为止,多次固相萃取(SPE)和2D-LC-MS/MS系统是减少或分离内源性干扰的主要解决方案。但2D-LC监测方法每个样品需要利马前列素的人体血浆药动学研究至少需要监测方法的LLOQ达到0.3~0.5pg/mL。按照文献建立的前处理方案相当长的分析时间(>50min),通量较低,且2D-LC保留时间的重现性也是众所周知的问题。另外,2D-LC方法在不同实验室间的重现、建立及优化都需要花费较长时间,限制了2D-LC方法在药代动力学中的广泛应用。

通过建立基于新一代离子淌度差分技术SelexION+和超高灵敏度QTRAP 6500+质谱仪测定人血浆中利马前列素的检测方法。该方法仅使用简单的LC分离,避免了2D-LC系统平台的复杂、繁琐及通量低等缺点,单样本分析时间仅为15min,具有良好的灵敏度及重现性,效率较2D-LC系统提高3倍以上。

试验结果:利马前列素的人体血浆药动学研究至少需要检测方法的LLOQ达到0.3~0.5pg/ml。按照文献建立的前处理方案对血浆样本进行三次SPE处理后,仅使用常规1D-LC-MS/MS系统,高背景噪音(>104cps)以及大量的内源性干扰使得方法难以满足检测要求。离子淌度差分技术SelexION1D-LC基础上提供了多一维的分离,在母离子进入Q1前,根据待测物离子的化学结构性质不同,通过特定的补偿电压COV进行分离,能够有效地降低或去除背景噪音、分离同分异构体,提供较常规方法更优异的选择性和特异性。

SelexION+技术是新一代离子淌度差分技术,与SelexION+相比,离子传输效率提升2倍以上。具有比SelexION+更高的灵敏度。基于SelexION+技术的MRM检测模式能与超高效液相色谱兼容,即使峰宽<0.1  min的色谱峰,同时检测12MRM离子对,也能满足10个数据点以上,保证重现性和灵敏度。

凭借SelexION技术优异的选择性和QTRAP 6500+超高MRM灵敏度,仅用1D-LC分离,人血浆中利马前列素的LLOQ可达0.3pg/ml(以血浆浓度计),并获得良好的线性和准确度,完全满足利马前列素人体血浆药代动力学研究的需要。无需复杂的2D-LC 系统,弥补了2D-LC 分析时间长,通量低的缺陷,分析效率较2D-LC 系统提高3 倍以上(15 min vs. 50 min),且具有良好的色谱重现性。整个分析流程较2D-LC 大大简化,适于在不同实验室间进行方法转移、重现。

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